微生物多样性测序，通常采用高通量测序技术，如Illumina MiSeq、HiSeq等平台进行16S rRNA基因或者ITS区域的扩增子测序。在这个过程中，测序接头和barcode标记的添加是至关重要的步骤。 首先，测序接头的添加：在对微生物样本DNA提取并进行PCR扩增特定区域（例如16S rRNA或ITS）后，需要在这些扩增片段两端加入一段已知序列的接头。这是因为高通量测序仪读取的是片段两端的信息，而原始的PCR产物两端并不具备与测序平台相匹配的接头序列。接头一般由平台特异性的序列组成，以便与测序芯片上的锚定序列杂交，从而确保样品序列能够被有效捕获并进行测序。 其次，barcode标记：在大规模研究中，可能同时处理多个样本，为了区分来自不同样本的序列信息，就需要引入barcode系统，即在每个样本的PCR产物上添加一个独特的短序列标签（barcode）。这个barcode就像是一张“身份证”，能够在后期数据处理阶段将各个样本的数据准确无误地对应起来。在实际操作中，barcode序列通常会融合到接头序列中一并添加，这样就形成了带有唯一标识的测序接头。 总的来说，通过测序接头的添加和barcode标记，可以实现对大量样本的同时测序，并在数据分析阶段依据barcode区分出每个样本的序列信息，进而分析微生物群落结构和多样性的变化。