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测序微生物多样性分析流程

1 微生物多样性测序技术概述 1.1 微生物多样性测序的不同测序平台介绍(如Illumina、 PacBio、 Nanopore) 1.2 微生物多样性测序的测序策略选择(16S rRNA、ITS、宏基因组等) 2 微生物多样性测序的实验设计与样本采集 2.1 微生物多样性测序的样本来源和类型确定 2.2 微生物多样性测序的样本收集、保存与运输的方法 2.3 DNA/RNA提取方法及其对微生物多样性的影响 3 PCR扩增与文库构建 3.1 微生物多样性测序的目标区域(如16S rRNA V4区)的选择与引物设计 3.2 PCR反应体系及条件优化 3.3 微生物多样性测序的文库构建流程与质量控制 3.4 微生物多样性测序的测序接头的添加与barcode标记 4 高通量测序与数据产出 4.1 微生物多样性测序的测序平台操作与实验流程 4.2 微生物多样性测序的数据质量评估与过滤标准 4.3 微生物多样性测序的原始序列读长、覆盖率等基本统计分析 5 微生物多样性测序的生物信息学数据分析 5.1 微生物多样性测序的序列拼接与质量控制 5.2 OTU(Operational Taxonomic Units)聚类与物种注释 5.3 α多样性指数计算(如Chao1、Shannon指数等) 5.4 β多样性分析(如PCA、PCoA、NMDS, UniFrac或 Bray-Curtis距离) 5.5 群落结构差异性检验(如ANOSIM、PERMANOVA等) 5.6 功能预测(如基于PICRUSt、Tax4Fun等工具进行KEGG功能注释与富集分析) 6 微生物多样性测序的结果解读与可视化 6.1 微生物群落结构特征总结 6.2 特征菌群与环境/疾病关联性分析 7 微生物生态网络构建与核心微生物鉴定 7.1 Co-occurrence网络构建与分析 7.2 核心微生物识别及其功能探究 8 微生物多样性测序的报告撰写与研究成果发表 8.1 微生物多样性测序的科研报告结构与内容组织 8.2 微生物多样性测序的数据共享与科研诚信原则 8.3 微生物多样性测序的学术论文写作与投稿指南
首页 教程 测序微生物多样性分析流程 微生物多样性测序的不同测序平台介绍(如Illumina、 PacBio、 Nanopore)
1. Illumina测序平台: Illumina是目前广泛应用的高通量测序技术平台,以其极高的测序深度和准确性著称。其核心技术为边合成边测序(Sequencing by Synthesis, SBS)和桥式PCR扩增(Bridge Amplification)。在微生物多样性研究中,Illumina平台常用于16S rRNA基因或ITS区域等靶向测序,通过分析序列变异来推断样本中的微生物组成及丰度。此外,对于宏基因组测序,Illumina平台可以提供数以百万计的短读长序列,虽然单个读长较短(通常150bp-300bp),但凭借其高覆盖度和低错误率,非常适合大规模微生物群落结构和功能解析。 2. PacBio测序平台: PacBio测序平台采用的是单分子实时测序(Single Molecule, Real-Time Sequencing, SMRT)技术,其特点是产出超长读长序列(平均读长可达10Kb以上),能够跨越复杂的重复序列和结构区域,因此在微生物全基因组测序、复杂微生物混合样本的宏基因组测序以及全长16S rRNA基因测序等方面具有优势。尽管数据错误率相对较高,但通过CCS(Circular Consensus Sequencing)策略,能有效提高序列准确度,从而更全面地揭示微生物多样性和系统发育信息。 3. Nanopore测序平台: Nanopore测序技术由Oxford Nanopore Technologies公司开发,是一种新型的单分子直接测序技术。它的工作原理是基于生物纳米孔传感器对核酸链上单个碱基的电流信号变化进行实时监测。该平台的最大特色在于能够产出超长读长序列(理论上无长度限制,实际一般在几千到几十万碱基),同时设备小巧便携,实现实时测序。在微生物多样性研究中,Nanopore测序可实现快速完整的微生物基因组测序,并且适用于病原体检测、环境微生物调查等多种场景。然而,由于其原始数据错误率相对较高,需要配合相应的生物信息学方法进行纠错和分析。

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