PCR(聚合酶链反应)是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段。这项技术的基础是DNA复制过程,通过这个过程可以产生大量的目标DNA片段。
PCR的过程包括三个主要步骤:变性、退火和延伸。首先,DNA样本在高温下变性,使得双链DNA分开成为两条单链模板。然后,在适当的温度下,引物与单链模板进行结合,这是退火的过程。最后,在DNA聚合酶的作用下,引物沿着模板进行延伸,形成新的DNA链。这三个步骤反复进行,每次循环都会使目标DNA的数量翻倍。
实时PCR是在PCR的基础上发展起来的一种技术,它可以实时监测PCR反应的进程。实时PCR使用荧光标记的引物或探针,当这些标记物与目标DNA结合时,会产生荧光信号。随着PCR反应的进行,目标DNA的数量不断增加,相应的荧光信号也会不断积累。
实时PCR的主要优点是可以精确地定量目标DNA的数量。通过绘制荧光信号与循环次数的关系图(即CT值曲线),可以计算出初始样本中目标DNA的数量。此外,实时PCR还可以用于检测基因表达水平的变化,以及病原体的检测等应用。