第一代测序技术,也称为Sanger测序,是由英国生物化学家Frederick Sanger在1977年发明的。这种技术是基于链终止原理,通过逐步添加核苷酸到正在扩增的DNA链中,直到到达特定的停止点为止。这些停止点是由于加入了一种特殊的dNTP(脱氧核糖核苷三磷酸),它含有一个荧光标记和一个无法继续延伸的羟基。
在Sanger测序中,通常会同时进行四个不同的反应,每个反应都使用一种不同的特殊dNTP。这样,在每个反应结束时,就会得到一组长度不同的DNA片段,它们分别代表了原始DNA序列的不同部分。然后,可以通过凝胶电泳将这些片段分离,并通过检测它们的荧光标记来确定它们的大小和顺序。
虽然Sanger测序可以提供高质量的DNA序列数据,但它也有一些限制。例如,它需要大量的起始DNA,并且一次只能分析一个样本。此外,对于大型基因组或复杂样品,Sanger测序可能需要很长时间和高昂的成本。因此,尽管Sanger测序仍然是某些应用中的金标准,但现在已经逐渐被高通量测序技术所取代。