酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,简称ELISA)是一种广泛应用的生物化学技术,用于检测和定量样本中的抗原或抗体。这种技术结合了酶标记的抗体和免疫反应的特异性,使得它能够高灵敏度、高特异性地检测多种类型的分子。
ELISA的基本步骤包括:
1. 包被:首先,在96孔板等固相载体上包被已知的抗原或抗体。这一步是为了让待测样品有地方可以结合。
2. 封闭:在包被完成后,加入封闭剂以防止非特异性结合。
3. 加样:将待测样品添加到孔中,如果样品中含有与包被物对应的抗原或抗体,它们就会结合在一起。
4. 结合:加入标记有酶的第二抗体,该抗体能识别并结合第一步中形成的抗原-抗体复合物。
5. 清洗:通过洗涤去除未结合的酶标抗体。
6. 显色:加入能被酶催化的底物,当酶催化底物反应时,会产生颜色变化或荧光信号。
7. 测量:通过测量每个孔的颜色深浅或者荧光强度,可以确定样品中抗原或抗体的浓度。
8. 结果分析:根据标准曲线,计算出样品中目标分子的浓度。
ELISA技术广泛应用于临床诊断、科研实验、食品安全等多个领域,例如艾滋病、乙肝、丙肝等病毒性疾病的诊断,食品中残留农药、兽药的检测等。