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细胞生物实验

1 细胞生物学基础 1.1 细胞结构和功能 1.2 细胞周期和分裂 1.3 细胞信号转导 2 细胞生物学实验设计与实施 2.1 细胞生物学实验设计原则 2.2 细胞生物学实验材料准备 2.3 细胞生物学实验设备操作 2.4 细胞生物学数据采集与分析 3 常见细胞生物实验 3.1 显微镜观察实验 3.1.1 普通光学显微镜观察 3.1.2 荧光显微镜观察 3.1.3 共聚焦显微镜观察 3.2 细胞培养实验 3.2.1 细胞培养实验之原代细胞培养 3.2.2 细胞培养实验之细胞系培养 3.2.3 细胞培养实验之无血清培养 3.3 细胞活力与毒性检测实验 3.3.1 MTT法 3.3.2 CCK-8法 3.3.3 琼脂糖平板克隆形成实验 3.4 细胞迁移与侵袭实验 3.4.1 细胞划痕实验 3.4.2 Boyden小室实验 3.5 细胞凋亡实验 3.5.1 Hoechst染色法 3.5.2 TUNEL法 3.6 细胞周期分析实验 3.6.1 PI染色流式细胞术 3.6.2 BrdU掺入实验 3.7 蛋白质表达水平检测实验 3.7.1 免疫荧光染色 3.7.2 ELISA 3.8 基因表达水平检测实验 3.8.1 RT-PCR 3.8.2 qRT-PCR 3.8.3 RNA-seq 3.9 细胞信号通路研究实验 3.9.1 细胞信号通路研究之抑制剂处理 3.9.2 细胞信号通路研究之免疫共沉淀 3.9.3 CHIP-qPCR 4 细胞实验报告撰写 4.1 细胞生物学实验目的和原理 4.2 细胞生物学实验材料和方法 4.3 细胞生物学实验结果和分析 4.4 细胞生物学实验结论和讨论
首页 教程 细胞生物实验 细胞信号通路研究之免疫共沉淀
免疫共沉淀(Immunoprecipitation,简称IP)是一种广泛应用于细胞信号通路研究的技术。它的基本原理是利用抗原-抗体特异性结合的性质,将细胞或组织中特定蛋白质及其相互作用的蛋白复合物沉淀下来,然后通过电泳、质谱等技术对这些蛋白质进行定性和定量分析。 在细胞信号通路的研究中,免疫共沉淀主要用于检测和验证蛋白质之间的相互作用。例如,如果我们想知道某种蛋白质A是否与另一种蛋白质B相互作用,就可以通过以下步骤进行: 1. 首先,我们需要从细胞或组织中提取蛋白质。 2. 然后,向蛋白质溶液中加入针对蛋白质A的特异性抗体。这种抗体能够与蛋白质A特异性结合,形成抗原-抗体复合物。 3. 接着,加入能与抗体结合的固相载体,如琼脂糖珠,使抗原-抗体复合物沉淀下来。 4. 最后,洗涤固相载体,去除未结合的蛋白质,然后用一种能破坏抗原-抗体结合的方法(如加热或酸碱处理)释放出蛋白质A及其相互作用的蛋白质B。 5. 通过电泳和质谱等技术鉴定和定量蛋白质B,从而确定蛋白质A与蛋白质B是否存在相互作用。 除了用于检测蛋白质间的相互作用,免疫共沉淀还可以用于检测蛋白质的磷酸化、乙酰化等翻译后修饰状态,以及蛋白质的定位和稳定性等。因此,免疫共沉淀在细胞信号通路的研究中具有重要的应用价值。

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