qRT-PCR，全称Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction，中文名为定量实时聚合酶链反应。这是一种在生物医学研究和临床诊断中广泛应用的技术。
qRT-PCR的基本原理是利用荧光信号对PCR扩增过程进行实时监测，从而实现对特定基因或DNA片段的定量分析。整个过程包括RNA提取、反转录为cDNA、PCR扩增和荧光检测四个步骤。
1. RNA提取：首先从细胞或组织样本中提取总RNA，这是qRT-PCR的第一步。这个过程需要使用特殊的试剂来保护RNA不被降解，并将RNA与蛋白质和其他杂质分离出来。
2. 反转录为cDNA：由于PCR只能扩增DNA，而qRT-PCR通常用于检测mRNA水平，因此需要将RNA逆转录为cDNA。这个过程由逆转录酶催化完成。
3. PCR扩增：然后，使用特异性的引物和Taq DNA聚合酶对cDNA进行PCR扩增。每个循环都会使目标DNA的数量翻倍，因此可以在短时间内获得大量的目标DNA。
4. 荧光检测：在PCR扩增过程中，会加入一种能与DNA结合并发出荧光的染料或者特异性荧光探针。随着PCR的进行，DNA数量不断增加，荧光强度也会相应增强。通过监测荧光信号的变化，就可以实时监测PCR的过程，并根据荧光信号与DNA量的线性关系，计算出起始模板的量。
qRT-PCR具有灵敏度高、准确性好、操作简便等优点，可以广泛应用于基因表达差异分析、病原体检测、遗传性疾病诊断等领域。
