RT-PCR,全称是Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,中文译为反转录聚合酶链反应。这是一种分子生物学技术,用于检测和测量细胞中特定基因的表达水平。
RT-PCR过程主要分为三个步骤:
1. 反转录:首先,利用反转录酶将RNA转化为cDNA(互补DNA)。这是因为RNA在体外不稳定,容易被降解,而DNA则相对稳定。这个过程被称为逆转录。
2. 聚合酶链反应:然后,通过PCR技术扩增这些cDNA。PCR是一个循环的过程,每个循环包括变性、退火和延伸三个步骤。在变性阶段,DNA双链被加热至高温而分开;在退火阶段,引物与模板DNA结合;在延伸阶段,DNA聚合酶在引物的引导下合成新的DNA链。经过多次循环,目标DNA片段的数量会指数级增加。
3. 产物分析:最后,通过凝胶电泳或其他方法分析PCR产物,可以得到目标基因的表达量信息。
RT-PCR广泛应用于分子生物学、遗传学、生物医学等领域,例如疾病诊断(如新冠病毒检测)、基因功能研究、基因表达调控研究等。