CCK-8法,全称Cell Counting Kit-8,是一种基于WST-8的细胞增殖和毒性检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的黄色水溶性四唑盐,能在电子载体1-methoxy PMS的存在下被线粒体内的脱氢酶还原为水不溶性的甲臜形式(formazan),生成的甲臜物在450nm处有最大吸收峰,其颜色深浅与活细胞的数量成正比。
使用CCK-8法进行细胞活力检测的步骤如下:
1. 将待测细胞接种到96孔板中,每孔加入一定量的细胞悬液。
2. 在适宜的条件下培养一段时间后,向每个孔中加入一定体积的CCK-8溶液。
3. 继续孵育一段时间(通常为1-4小时)后,用酶标仪在450nm波长处测定各孔的光密度值。
4. 根据空白对照孔和实验孔的光密度值计算细胞的存活率或抑制率。
CCK-8法的优点在于操作简单、快速,且灵敏度高,适用于各种类型的细胞,包括哺乳动物细胞、植物细胞、酵母菌等。此外,CCK-8法不需要洗涤步骤,避免了因洗涤过程中的细胞损失而导致的误差。