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细胞生物实验

1 细胞生物学基础 1.1 细胞结构和功能 1.2 细胞周期和分裂 1.3 细胞信号转导 2 细胞生物学实验设计与实施 2.1 细胞生物学实验设计原则 2.2 细胞生物学实验材料准备 2.3 细胞生物学实验设备操作 2.4 细胞生物学数据采集与分析 3 常见细胞生物实验 3.1 显微镜观察实验 3.1.1 普通光学显微镜观察 3.1.2 荧光显微镜观察 3.1.3 共聚焦显微镜观察 3.2 细胞培养实验 3.2.1 细胞培养实验之原代细胞培养 3.2.2 细胞培养实验之细胞系培养 3.2.3 细胞培养实验之无血清培养 3.3 细胞活力与毒性检测实验 3.3.1 MTT法 3.3.2 CCK-8法 3.3.3 琼脂糖平板克隆形成实验 3.4 细胞迁移与侵袭实验 3.4.1 细胞划痕实验 3.4.2 Boyden小室实验 3.5 细胞凋亡实验 3.5.1 Hoechst染色法 3.5.2 TUNEL法 3.6 细胞周期分析实验 3.6.1 PI染色流式细胞术 3.6.2 BrdU掺入实验 3.7 蛋白质表达水平检测实验 3.7.1 免疫荧光染色 3.7.2 ELISA 3.8 基因表达水平检测实验 3.8.1 RT-PCR 3.8.2 qRT-PCR 3.8.3 RNA-seq 3.9 细胞信号通路研究实验 3.9.1 细胞信号通路研究之抑制剂处理 3.9.2 细胞信号通路研究之免疫共沉淀 3.9.3 CHIP-qPCR 4 细胞实验报告撰写 4.1 细胞生物学实验目的和原理 4.2 细胞生物学实验材料和方法 4.3 细胞生物学实验结果和分析 4.4 细胞生物学实验结论和讨论
首页 教程 细胞生物实验 MTT法
MTT法,全称3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(Methyl Thiazolyl Tetrazolium),是一种常用的检测细胞活力和增殖的实验方法。该方法主要通过检测细胞线粒体脱氢酶活性来反映细胞的代谢状态。 具体步骤如下: 1. 将待测细胞接种在96孔板中,每孔加入一定量的细胞悬液。 2. 在适宜的条件下培养一段时间后,吸去培养液,每孔加入含有MTT的无血清培养液。 3. 继续孵育一段时间,使MTT被细胞内的脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶——甲臜(Formazan)。 4. 吸去上清液,每孔加入DMSO或其他有机溶剂,振荡混匀,以溶解甲臜。 5. 用酶标仪在特定波长下测定各孔的光吸收值(OD值)。 OD值与细胞的数量成正比,因此可以通过OD值的变化来判断细胞的活力和增殖情况。如果OD值增大,说明细胞活力或增殖能力增强;反之,如果OD值减小,说明细胞活力或增殖能力减弱。 需要注意的是,MTT法只能检测到活细胞的代谢活性,对于已经死亡但还未被清除的细胞则无法区分。此外,由于MTT法需要将甲臜结晶溶解在有机溶剂中,因此对某些不耐受有机溶剂的细胞可能会产生影响。

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