MTT法,全称3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(Methyl Thiazolyl Tetrazolium),是一种常用的检测细胞活力和增殖的实验方法。该方法主要通过检测细胞线粒体脱氢酶活性来反映细胞的代谢状态。
具体步骤如下:
1. 将待测细胞接种在96孔板中,每孔加入一定量的细胞悬液。
2. 在适宜的条件下培养一段时间后,吸去培养液,每孔加入含有MTT的无血清培养液。
3. 继续孵育一段时间,使MTT被细胞内的脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶——甲臜(Formazan)。
4. 吸去上清液,每孔加入DMSO或其他有机溶剂,振荡混匀,以溶解甲臜。
5. 用酶标仪在特定波长下测定各孔的光吸收值(OD值)。
OD值与细胞的数量成正比,因此可以通过OD值的变化来判断细胞的活力和增殖情况。如果OD值增大,说明细胞活力或增殖能力增强;反之,如果OD值减小,说明细胞活力或增殖能力减弱。
需要注意的是,MTT法只能检测到活细胞的代谢活性,对于已经死亡但还未被清除的细胞则无法区分。此外,由于MTT法需要将甲臜结晶溶解在有机溶剂中,因此对某些不耐受有机溶剂的细胞可能会产生影响。