酶联免疫吸附测定(ELISA)是一种广泛应用的生物化学技术,用于检测和定量样本中的特定抗原或抗体。这种技术结合了酶标记物的高灵敏度和特异性,以及免疫反应的特异性和亲和力。
基本原理:ELISA的工作原理基于抗原-抗体之间的特异性结合。首先,将已知的抗原或抗体固定在塑料板上的微孔中,形成固相阶段。然后,加入待测样品,如果样品中含有与固相阶段互补的抗原或抗体,则会发生特异性结合。接下来,加入另一种带有酶标记的抗体或抗原,与已经结合的抗原或抗体进行反应。最后,加入酶底物,被酶标记物催化产生颜色变化,通过比色法或者光度计测量颜色深浅,从而定量分析样品中的抗原或抗体浓度。
类型:根据实验目的和步骤的不同,ELISA可以分为直接法、间接法、竞争法和夹心法等不同类型。
应用:ELISA广泛应用于临床诊断、科研研究、药物筛选等领域。例如,在艾滋病、乙肝、丙肝等病毒感染的诊断中,常常使用ELISA检测患者体内的病毒抗体。此外,ELISA也可以用于检测食物中的过敏源、环境污染物、药物残留等。
优点:ELISA具有操作简单、灵敏度高、特异性好、可同时处理大量样品等优点。然而,也存在一些局限性,如易受干扰因素影响、可能存在交叉反应等问题。