Sanger测序，也称为链终止法或双脱氧核苷酸测序，是一种用于确定DNA序列的经典方法。该技术由英国生物化学家弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）在1977年发明，并因此获得了1980年的诺贝尔化学奖。 Sanger测序的基本原理是通过在DNA复制过程中引入特异性的终止子来实现的。这些终止子是含有3'羟基的脱氧核苷酸三磷酸（dNTP），它们可以被DNA聚合酶识别并添加到正在合成的新DNA链上。然而，与正常的dNTP不同的是，这些终止子的2'碳原子上没有氧原子，这使得它们无法进一步与下一个dNTP形成磷酸二酯键，从而在新DNA链的特定位置上形成了一个终止点。 在实际操作中，Sanger测序通常使用四种不同的终止子，分别对应于DNA的四种碱基（腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶和鸟嘌呤）。将待测DNA片段、DNA聚合酶、正常dNTP和终止子混合在一起，然后进行PCR扩增。这样，在每个PCR循环中，都会有一部分新合成的DNA链因为遇到了终止子而停止延伸。由于四种终止子的比例不同，因此每种终止子在新DNA链上的终止位置也会有所不同。最终，通过电泳分离和检测这些不同长度的DNA链，就可以得到待测DNA片段的完整序列。 尽管Sanger测序是一种非常成熟且准确的测序技术，但其缺点是需要大量的DNA模板，并且对于长片段的DNA序列来说，操作过程可能会变得非常复杂和耗时。因此，近年来，随着高通量测序技术的发展，Sanger测序的应用已经逐渐减少。但对于一些需要极高精度的测序任务，例如验证基因突变或确定小片段DNA序列，Sanger测序仍然是不可或缺的工具。