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MLST分型

1 MLST概述 1.1 MLST定义和基本原理 1.2 MLST的发展历程 1.3 MLST在微生物学研究中的应用 2 MLST方法和技术 2.1 MLST基于PCR的方法 2.1.1 PCR引物设计 2.1.2 PCR反应条件优化 2.1.3 PCR产物纯化和测序 2.2 MLST基于新一代测序技术的方法 2.2.1 MLST的测序文库构建 2.2.2 MLST的高通量测序 2.2.3 MLST的数据分析和解读 2.3 其他MLST方法 2.3.1 MLST的多重PCR 2.3.2 MLST的荧光定量PCR 2.3.3 MLST的数字PCR 3 MLST数据库和软件 3.1 MLST数据库介绍 3.1.1 PubMLST 3.1.2 BIGSdb 3.1.3 EnteroBase 3.2 MLST数据分析软件 3.2.1 Geneious 3.2.2 MEGA 3.2.3 BioNumerics 4 MLST结果解读和应用 4.1 MLST分型结果解读 4.1.1 ST(序列型)和CC(克隆复合群)的概念 4.1.2 MLST结果的树状图和网络图的解读 4.2 MLST在疾病监测和防控中的应用 4.2.1 MLST在疾病暴发调查 4.2.2 MLST在病原体传播模式研究 4.2.3 MLST在抗生素耐药性监测 4.3 MLST在生物多样性研究中的应用 4.3.1 MLST在微生物种群结构分析 4.3.2 MLST在物种分化和进化研究 5 MLST实验操作和注意事项 5.1 实验材料准备 5.1.1 MLST实验的样品采集和保存 5.1.2 DNA提取 5.2 实验步骤 5.2.1 PCR扩增 5.2.2 PCR产物纯化 5.2.3 测序 5.3 MLST实验注意事项 5.3.1 实验安全 5.3.2 实验质量控制 5.3.3 实验数据管理 6 MLST未来发展趋势和挑战 6.1 新一代测序技术对MLST的影响 6.2 MLST在精准医疗和个性化治疗中的应用前景 6.3 MLST标准化和数据共享的问题与对策
首页 教程 MLST分型 MLST的多重PCR
MLST全称为Multi-Locus Sequence Typing,是一种基于多位点序列分析的分型技术。它通过PCR扩增和测序多个 housekeeping基因(即在细胞代谢中起关键作用的基因),然后比较这些基因的序列差异来确定菌株的类型。 多重PCR是在一次PCR反应中同时扩增多个目标基因的技术。在MLST的多重PCR中,通常会选择7-10个housekeeping基因作为目标基因,设计针对每个基因的特异性引物,然后在同一管反应液中进行PCR扩增。这样可以大大提高实验效率,减少实验成本。 PCR扩增完成后,需要对产物进行测序,然后将测得的序列与已知的序列数据库进行比对,根据每个基因座上的等位基因变异情况来确定菌株的ST(Sequence Type)。如果一个菌株在所有被测基因座上的等位基因都与已知的某一ST相同,则该菌株就被分到这一ST中;如果在某些基因座上存在新的等位基因,则会产生新的ST。 MLST的多重PCR技术具有高度的分辨率和重现性,是目前微生物分类和流行病学研究中的重要工具。

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