MLST全称为Multi-Locus Sequence Typing,是一种基于多位点序列分析的分型技术。它通过PCR扩增和测序多个 housekeeping基因(即在细胞代谢中起关键作用的基因),然后比较这些基因的序列差异来确定菌株的类型。
多重PCR是在一次PCR反应中同时扩增多个目标基因的技术。在MLST的多重PCR中,通常会选择7-10个housekeeping基因作为目标基因,设计针对每个基因的特异性引物,然后在同一管反应液中进行PCR扩增。这样可以大大提高实验效率,减少实验成本。
PCR扩增完成后,需要对产物进行测序,然后将测得的序列与已知的序列数据库进行比对,根据每个基因座上的等位基因变异情况来确定菌株的ST(Sequence Type)。如果一个菌株在所有被测基因座上的等位基因都与已知的某一ST相同,则该菌株就被分到这一ST中;如果在某些基因座上存在新的等位基因,则会产生新的ST。
MLST的多重PCR技术具有高度的分辨率和重现性,是目前微生物分类和流行病学研究中的重要工具。